透射式熒光顯微鏡:
透射式熒光顯微鏡由汞燈發(fā)出的各種譜線的光線,經(jīng)激發(fā)濾光片后只讓某一種波長的紫外光線通過,如波長為404.7nm藍(lán)紫光,經(jīng)反光鏡后,激發(fā)樣品產(chǎn)生熒光。這個濾光片將其它波長的光線濾掉,并使樣品激發(fā)熒光,所以稱激發(fā)濾光片。
通常,熒光波長比激發(fā)樣品的光的波長大得多,是可見光。這樣產(chǎn)生的熒光和透過樣品的一部分激發(fā)光(紫外光),經(jīng)物鏡成像后,人眼即可用目鏡觀察熒光圖像。為了防止紫外光進(jìn)人目鏡視場,降低圖像材度和損傷人眼,安放了一塊截止濾光片,它只讓某一部分波長的譜線通過,如只讓500~750nm的可見光通過,而不讓500nm以下的光通過,所以稱為截止濾光片。
反射式熒光顯微鏡:
反射式熒光顯微鏡和透射式熒光顯微鏡的原理類同。
反射式熒光顯微鏡有下列優(yōu)點(diǎn):
①光能的利用率高。在反射式熒光顯微鏡中,激發(fā)光直接照射在標(biāo)本的觀察表面;而在透射式熒光顯微鏡中,激發(fā)光穿過具有一定厚度的標(biāo)本后才抵達(dá)觀察表面,能量被衰減。
②反射式熒光顯微鏡可以觀察不透明標(biāo)本。所以現(xiàn)在大多采用反射式熒光顯微鏡。然而,實(shí)現(xiàn)反射熒光的技術(shù)難度較高,此技術(shù)隨著電子計算機(jī)的出現(xiàn),薄膜技術(shù)的不斷發(fā)展才得以實(shí)現(xiàn)。實(shí)際反射式熒光顯微鏡中,激發(fā)、截止濾光片和半透分光鏡是做成一個濾光片組。